细胞爬片就是让细胞(贴壁细胞)在片子(盖玻片)上生长。主要用来做免疫细胞化学啊,原位杂交等吧。在做这些实验时,制作标本有两种,一是离心做细胞涂片,二是细胞爬片。利用贴壁细胞在玻璃等物质上贴壁生长的特点,让它在盖玻片上生长,可以使制作的细胞片子更牢固,在后面的洗涤过程中,不易脱落。特别是在用粘附剂如多聚赖安酸处理过的片子上,细胞贴得更牢固。
细胞爬片的实验步骤:
1、将盖玻片用洗洁剂清洗干净,然后用自来水将洗洁剂冲洗干净,再用纯水冲洗三遍,75%的酒精中静置浸泡10min。
2、用镊子夹起盖玻片在酒精灯上将酒精烧干,温度不可太高。
3、将烧干的盖玻片放在六孔板中,待冷却后在6孔板中先加入2ml培养基,后加入细胞悬液,轻轻上下左右晃动,后置于37℃ 5% CO2培养箱中培养。
实验注意事项:
使用细胞爬片时,比如在六孔板中放入爬片,六孔板的孔底面积往往会比爬片面积多出一部分,加细胞悬液时常常就是细胞铺满整个孔底,有时细胞生长边集现象,就是靠近壁边缘密度要高些,这样处于中央玻片上爬的细胞数量就可能相对较少。
比较好的做法是将玻片放入孔板的孔内后,加细胞悬液时只滴到玻片上,一直滴到液体布满整个玻片又不会溢出玻片边缘(因为液体表面张力作用可以很容易做到这一点。),放在培养箱里,等细胞贴壁后,取出,再滴加培养基布满整个孔底,继续培养,这样玻片上的细胞生长的密度就会很集中。