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细胞角蛋白19(CK19)酶联免疫分析试剂盒使用说明书
  • 发布日期:2009-10-28      浏览次数:1252
    • 人细胞角蛋白19(CK19)酶联免疫分析

      试剂盒使用说明书

      本试剂盒仅供研究使用。

      药品名称:

      通用名:人细胞角蛋白19(CK19)酶联免疫分析试剂盒

      使用目的:

      本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中细胞角蛋白19(CK19)含量。

      实验原理

      本试剂盒应用间接法测定标本中人细胞角蛋白19(CK19)水平。用纯化的人细胞角蛋白19(CK19)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入已知浓度的细胞角蛋白19(CK19)标准品和未知浓度的细胞角蛋白19(CK19)待检样品,温育后,加入生物素标记的抗IgG抗体,再与链霉亲和素-HRP结合,形成免疫复合物,经过*洗涤后加底物TMB显色。TMBHRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的细胞角蛋白19(CK19)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人细胞角蛋白19(CK19)浓度。

      试剂盒组成

      1

      20倍浓缩洗涤液

      50ml×1

       

       

      9

      标准品S12400ng/L

      0.5ml×1

      2

      链霉亲和素-HRP

      6ml×1

      标准品S21600ng/L

      0.5ml×1

      3

      酶标包被板

      12孔×8

      标准品S3800ng/L

      0.5ml×1

      4

      生物素标记的抗-IgG抗体

      6ml×1

      标准品S4400ng/L

      0.5ml×1

      5

      显色剂A

      6ml×1

      标准品S5200ng/L

      0.5ml×1 

      6

      显色剂B

      6ml×1/

      10

      密封袋

      1

      7

      终止液

      6ml×1

      11

      封板膜

      2

      8

      样品稀释液

      6ml×1

      12

      说明书

      1

       

      标本要求

      1不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

      2.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20保存,但应避免反复冻融

      操作步骤

      1.       根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。

      2.       加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品,生物素标记的抗-IgG抗体,链霉亲和素-HRP其余各步操作相同)、标准品孔、待测样品孔。然后在标准品孔中加入标准品50μl在样本反应孔中先加入待测样品10μl再加入样品稀释液40μl(样品zui终稀释度为5倍),盖上封板膜,轻轻振荡混匀,37温育45分钟。

      3.       配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用

      4.       洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复4次,拍干。

      5.       加生物素标记的抗-IgG抗体:每孔加入生物素标记的抗-IgG抗体50μl(空白孔除外)。37温育30分钟

      6.       洗涤:操作同4

      7.       加链霉亲和素-HRP:每孔加入50μl的链酶亲和素-HRP(空白孔除外),轻轻振荡混匀,37温育30分钟。

      8.       洗涤:操作同4

      9.       显色:每孔先加入显色剂A 50μl,再加入显色剂B 50μl,轻轻震荡混匀,37避光显色15分钟.

      10.   终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

      11.   测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

       

      计算

        以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值待入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

      注意事项

      1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

      2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

      3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

      4.  如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔*孔的OD值),请先将样本稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请zui后乘以稀释倍数(×5×n)。

      5.  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

      6.本试剂不同批号组分不得混用。显色剂B请避光保存。

      7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

      8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

      9. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

      线形范围:

      150ng/L -3000ng/L  

      规格:

      96人份/

      保存条件及有效期

      1.试剂盒保存:2-8

      2.有效期:6个月

       

       

       

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