细胞爬片的准备
1、盖玻片的选择:
爬片可用一般的盖玻片,也可用专用细胞爬片(价格比较昂贵)但是细胞贴壁牢固,拍出照片效果好。
2、爬片的剪裁:
可根据自己的需要,到染色时再将之切开,这样既保证了细胞均一性,又可同时做几个指标的染色剪裁成合适大小,置于6孔板、12孔板或24孔板。
3、爬片的使用前处理:
将剪裁好的爬片,置于浓硫酸中浸泡并过夜,第二天先用自来水冲洗20遍,再置于无水酒清中浸泡6小时,再用三蒸水冲洗3遍。
细胞爬片的操作
1、胰酶消化细胞后计数重悬细胞于培养基中。
2、加细胞前,根据玻片的大小,先在每个孔里准备放爬片的位置滴少量培养基,使玻片与培养皿靠培养基的张力粘合到一起,然后放玻片,防止加细胞悬液时玻片漂起,造成双层细胞贴片。
3、根据自己的需要选择合适的细胞密度接入培养板内即可。
4、待细胞贴壁后,可去上清加含药培养基。
5、按照实验设计,作用一定时间后取玻片。
取玻片时由于玻片与培养皿底结合较紧,张力较大,一般将注射器针头针尖向背面弄个小钩,这样将爬片轻轻勾起,用小镊子取出就可以了。