（1）0.1M NaIO4：称取241mg高碘酸钠（广州化学试剂厂，批号830602）溶于蒸馏水10ml中。

（2）1mM PH4.4醋酸钠缓冲液：0.2M NaAc （1.361克/50ml）  3.7ml；0.2M HAc （0.601ml/50ml）  6.3ml；加蒸馏水至2,000ml。

（3）0.2M PH9.5碳酸盐缓冲液：Na2CO3 0.32g；NaHCO3 0.586g；加蒸馏水至50ml，再用蒸馏水作20倍稀释，即成0.01M PH9.5的碳酸盐缓冲液。

（4）NaBH4溶液（4mg/ml）：临用时称取NaBH4 4mg溶于1ml蒸馏水中。

（5）其它的试剂及器材可参见戊二醛标记法。

（1）称取5mgHRP溶解于1ml蒸馏水中。

（2）于上液中加入0.2ml新配的0.1M NaIO4溶液，室温下避光搅拌20分钟。

（3）将上述溶液装入透析袋中，对1mM PH4.4的醋酸钠缓冲液透析，4℃过夜。

（4）加20μl 0.2M PH9.5碳酸盐缓冲液，使以上醛化桯RP的PH升高到9.0-9.5，然后立即加入10mg IgG（抗体，或SPA 5mg）在1ml 0.01M碳酸盐缓冲液中，室温避光轻轻搅拌2小时。

（5）加0.1ml新配的4mg/ml NaBH4液，混匀，再置4℃ 2小时。

（6）将上述液装入透析袋中，对0.15M PH7.4 PBS透析，4℃过夜。

（7）在搅拌下逐滴加入等体积饱和硫酸铵，置4℃ 1小时。

（8）3000rpm离心半小时，弃上清。沉淀物用半饱和硫酸铵洗二次，zui后沉淀物溶于少量0.15M PH7.4的PBS中。

（9）将上述溶液装入透析袋中，对0.15M PH7.4的PBS缓冲盐水透析，去除铵离子后（用萘氏试剂检测），10,000rpm离心30分钟去除沉淀，上清液即为酶结合物，分装后，冰冻保存。

除标记物IgG量的计算，略有不同以外，其余均同戊二醛法。

IgG量（mg/ml）＝（OD280nm-OD403nm×0.3）×0.62