一、ELISA是什么？

ELISA是酶联免疫吸附测定法 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA) 的简称。它是在免疫酶技术的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术 。

ELISA是一种广泛应用在测定液体样本中的蛋白、抗体、或激素的免疫分析技术。酶联免疫吸附试验的标准程序，通常是把蛋白、抗体、或激素等（即抗原）直接或是以捕捉抗体（capture Ab）固定在固相载体上，再加入一级检测抗体（primarydetection Ab），形成一个抗原抗体的复合物。如果该抗体已经用酶（enzyme）标记了，即可用来直接测定抗原的量，若无，则可利用另一个酶标记的二级抗体来测定抗原的量。测定抗原量的方法是加入该酶的底质（substrate），作用后产生出现的颜色深浅和样本中的抗原量呈正比的关系，依此原理计算出样本中的抗原总量或浓度

二、ELISA通常分为四种类型：直接法、间接法、竞争法、夹心法等

1.直接法（Direct ELISA）仅需要抗原和酶标一抗，操作简便，可避免交叉反应，然而该方法要求酶标一抗有较高的特异性要求，同时也并非所有的一抗适合标记处理。直接法在实际运用中并不多见，它并不能对样本中抗体进行定量分析，因为样本中抗体是非酶标抗体，无法进行后续显色。该法经过改进就是竞争法。

2.间接法（Indirect ELISA）使用了二抗增加信号强度，也使抗体的选择多样化，然而间接法容易产生交叉反应。间接法只能用于测定抗体，主要用于疾病的诊断，其优点是只需要改变包被抗原，酶标抗体是通用的。

3.夹心法（Sandwich ELISA）分为双抗体夹心法和双抗原夹心法：

①双抗体夹心法中抗原被两个抗体——捕捉抗体和检测抗体，结合于不同位点。捕捉抗体固定于载体上，检测抗体通过结合抗原进行显色分析。应用于双抗体夹心法检测的抗体需是单抗，而且对同一抗原结合位点不同，如此才能避免交叉反应或两种抗体竞争性结合同一位点。夹心法具有高灵敏度、高专一性的优势，但该法只适用于有多个结合位点的抗原检测，主要用于检测各种大分子抗原——例如在医学检测中测定HBsAg、HBeAg、AFP等。由于双抗体夹心法特异性高，在检测过程中有时会将样本和酶标抗体同时加入进行反应（一步法），此时如果样本中抗原含量过高会导致其与固相抗体和酶标抗体均有结合而  不形成“夹心复合物"，此时测出的结果将低于实际含量甚至是阴性结果（钩状效应hook ffect）。因此，如果使用一步法测定样本中抗原含量时要注意测量的线性范围，另外使用高亲和力的单抗也可削弱钩状效应。

②双抗原夹心法中抗原被包被于固相，检测样本中的抗体结合于抗原后，使用酶标的抗原进行结合及后续反应，可以用来测定样本中的抗体。双抗原夹心法的关键在于酶标抗原的制备，需要根据抗原结构进行设计，在医学检验上测定抗HBsAg抗体采用的就是此法，检测时被测样本不需要稀释即可直接进行测定，故此灵敏度相对而言高于间接法。

4.竞争法（Competitive ELISA）是用样本中的游离抗体/抗原与固相的酶标抗体/抗原竞争性结合的分析方法。当游离抗体（或抗原）浓度越高，则能与固定抗原（或抗体）结合的酶标抗体（或抗原）就越少，后续显色就越浅，即与对照相比，显色越浅，表示检测样本中抗体（或抗原）含量越高。该法适合比较不纯的样本，且重复性好，但是检测的灵敏度和专一性较差。竞争法测抗体常常用于检测某些干扰物质不易去除的样本及难以纯化得到抗原等情况。竞争法测抗原常用于检测小分子抗原及半抗原，这类抗原通常缺乏两个以上的识别位点，不适用于双抗夹心法进行测定。