一、 复苏
1. 把冻存管
2. 把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中(用培养基把冻存管洗一遍,把粘在壁上的细胞都洗下来),1000转离心5分钟。
3. 把上清液
4. 标好细胞种类和日期、培养人名字等,放到CO2培养箱中培养,细胞贴壁后换培养基。
5. 3天换一次培养基。
二、 传代
1. 培养皿
2. 把原有培养基吸掉。
3. 加适当的胰蛋白酶(能覆盖细胞就行),消化1-2分钟。
4. 细胞都变圆后加如入等体积的含血清的培养基终止消化。
5. 用移液枪吹打细胞,把细胞都悬浮起来。
6. 把细胞吸到15ml的离心管中,1000转离心5分钟。
7. 倒掉上清液,加1-2ml培养基,把细胞都吹起来。
8. 根据细胞种类把细胞传到几个培养皿中。
三、 冻存
把细胞消化下来并离心(同上)。用配好的冻存液把细胞悬浮起来,分装到灭菌的冻存管中,静止几分钟,写明细胞种类,冻存日期。4℃ 30min,-20℃ 30min,-80℃过夜,然后放到液氮灌中保存。 冻存液