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小鼠肿瘤坏死因子α试剂盒的原理和操作方法
  • 发布日期:2023-08-03      浏览次数:557
    • 实验原理
      试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。
      往预先包被肿瘤坏死因子α(TNF-α)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的肿瘤坏死因子α(TNF-α)呈正相关。
      用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。

      操作步骤
      1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
      2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
      3. 样本孔中加入待测样本40μL;空白孔不加。
      4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
      5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
      6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
      7. 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

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