免疫荧光技术(Immunofluorescence technique )又称荧光抗体技术,是标记免疫技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合,利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。
1、取出细胞爬片放到35mm或60mm用过的细胞培养皿里,PBS洗三遍。注意有的时候作的细胞爬片可能比较小,因此夹取的时候要小心。
2、4%多聚甲Q固定20分钟,PBS洗三遍。
3、0.2%Triton X 100通透10分钟,PBS洗三遍。
4、与二抗相同宿主的血清封闭30分钟,PBS洗三遍。
5、一抗4度湿盒内过夜,也可37度2小时,感觉前者效果好,PBS洗三遍。
6、二抗室温2小时,或者37度1半小时,PBS洗三遍。
7、最好用DAPI染核,然后直接照荧光片。
8、蒸馏水洗掉PBS,甘油封片,指甲油封片子的四周。