为防干裂,出厂前透析袋一般都经10%的甘油处理,透析袋中含有微量的硫化物、重金属和一些具有紫外吸收的杂质,它们对蛋白质和其他生物活性物质有害,用前必须除去。新购进的普通型透析袋必须经过处理才能使用。处理方法如下。
方法一:
把透析袋剪成适当长度(10-20cm)的小段。
在大体积(500ml)的2%(w/v)的碳酸氢钠和1mmol/L EDTA2Na(pH=8.0)中将透析袋煮沸10min。
用蒸馏水清洗透析袋。
放在500ml的1mmol/L EDTA2Na(pH=8.0)中将之煮沸10min。
冷却后,置于30%或者50%的酒精中,放于4℃冰箱,必须确保透析袋始终浸没在溶液内。从此时其取用透析袋必须戴手套。
在使用前要用蒸馏水将透析袋里外加以清洗干净。
方法二:
可先用50%乙醇煮沸1h,再依次用50%乙醇、0.01mol/L碳酸氢钠和1mmol/L EDTA(pH=8.0)溶液洗涤,最后用蒸馏水冲洗即可使用。
方法三:
实验要求不高的可以用简易方法处理。用沸水煮5至10min,再用蒸馏水洗净,即可使用。
不过现在也有杂质含量极少,无需预处理,只需用去离子水清洗即可使用的即用型透析袋。这种透析袋具有特殊的生物技术膜,不含硫化物及金属杂质。只是比普通型透析袋稍贵。
3)透析袋浓缩样品
大多数情况下,透析袋纯化的样品会被稀释。如果下游需要的样品浓度比较高时,可能需要对样品进行浓缩。透析袋本身浓缩的方法如下。
(1)吹干浓缩法: 将蛋白溶液装入透析袋内,放在电风扇下吹。此法简单,但速度慢,且温度不能过高,最好不要超过15℃。
(2)透析袋浓缩法: 利用透析袋浓缩蛋白质溶液是应用的一种。将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋(无透析袋可用玻璃纸代替),结扎,把高分子(6000-12000)聚合物如聚乙二醇(碳蜡)、聚乙/烯吡/咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可。也可将吸水剂配成30%-40%浓度的溶液,将装有蛋白液的透析袋放入即可。吸水剂用过后,可放入温箱中烘干或自然干燥后,仍可再用。
主要用于更换蛋白质的缓冲液,得有透析袋。不需要特殊的仪器。一般用得是PEG20000进行实验,简单,快速,对蛋白没什么影响。
此外,还有其他的样品浓缩方法,如冷冻干燥浓缩法、超滤膜浓缩法等。