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考马斯亮兰的测定含量
  • 发布日期:2022-12-15      浏览次数:590
    • 简介

      该方法用于大多数蛋白质的定量是比较精确的,但不适用于小分子碱性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污剂的浓度超过0.2%影响测定结果,如TritonX-100SDS、NP-40等。常用于细胞骨架的检验。

      浓染液

      100mg考马斯亮蓝G-250溶于50mL 95%乙醇,加入100mL 85%的磷酸,然后,用蒸馏水补充至1000mL,此染液放4℃至少6个月保持稳定。

      样本准备

      尽量使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品,例如测定抗体,可用纯化的抗体作为标准。如果待测样本是未知的,也可用抗体作为标准蛋白。通常在20μg—150μg/100μL之间绘制标准曲线。

      溶解

      将待测样本溶于100~1缓冲溶液中,该缓冲溶液应与制作标准曲线的缓冲溶液相同(最好用PBS)。

      稀释

      1:5用蒸馏水稀释浓染料结合溶液,如出现沉淀,过滤除去。

      作用

      每个样本加5mL稀释的染料结合溶液,作用5~30min。染液与蛋白质结合后,将由红色变为蓝色,在595nm波长下测定其吸光度。注意,显色反应不得超过30min。

      计算

      根据标准曲线计算待测样本的浓度。


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