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怎样提取及分离纯化金属硫蛋白
  • 发布日期:2022-11-18      浏览次数:663
    • 金属硫蛋白(metallothionein,MT)是一类广泛存在于生物中的低分子质量(6 ~ 7 kD)、无芳香族氨基酸、富含金属与半胱氨酸( Cys 20 %〜30 % )的生物学特性的金属结合蛋白。1957年,美国科学家Margoshes和Vallee最早从马肾中分离得到金属硫蛋白,继1975年Prinz从酿酒酵母中分离得到Cu- MT后,1977年科学家又从大豆的根中分离出富含Cd2+的类金属硫蛋白。

      金属硫蛋白中大量巯基赋予了其螯合重金属离子功能及重金属解毒作用,同时MT清除自由基的能力明显强于超氧化物歧化酶和谷胱甘肽,并调节生物体内微量元素浓度,调节细胞代谢、增殖分化,在食品、医药、保健、环境、化妆品、生物工程等领域中应用广泛。近年来,M T由于它的生物学功能,逐渐受到重视并成为研究的热点。

      1. 金属硫蛋白的提取技术

      关于M T的结构与功能的研究是当今化学、生物学和临床医学等领域的重要课题之一,随着研究工作的不断深人,对M T的用量和纯度的要求越来越高。匀浆离心法是提取海洋生物中MT最常采用的方法,提取剂选择性质稳定且与生理体液相容性好的Tris- HCl(简称Tris)缓冲溶液。不同浓度、p H 的提取液,以及样本与缓冲液的质量体积比、匀浆液离心转速大小,时间长短,都会对MT的提取率产生影响。因此,不同的方法,提取的MT含量和纯度等也不尽相同。

      2.  金属硫蛋白的分离纯化技术

      为深人研究金属硫蛋白结构和功能特性及其相关性,需要对金属硫蛋白提取液进行浓缩处理。在蛋白的纯化过程中,一次性处理较多样品时,可以采用超滤法进行脱盐浓缩,不但耗时短,浓缩的效率高,而且可降低蛋白质的损失率。目前,金属硫蛋白分离纯化技术主要有:膜分离技术、高效液相色谱、凝胶过滤色谱、离子交换色谱、毛细管电泳法等。

      使用的方法是凝胶过滤和离子交换技术相结合方法。凝胶过滤法的缺点是不能将MT的亚型分开,所以一般采用高效液相色谱法(HPLC)对MT进行微量分离。高效液相色谱具有分离效果好、精密度与灵敏度佳、重现性好等优点,对于复杂成分的分离鉴定更有应用价值。

      ICPMS技术干扰较少,精密度高,分析速度快,检出限较低,动态线性范围宽,并且可提供准确的同位素信息。高效液相色谱法(HPLC )与质谱仪(ICP-MS )联用,不仅可以将微量MT分离,还能将MT亚型较好地分离,从而获得较高纯度的金属硫蛋白。

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