蛋白酶k是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶,用于生物样品中蛋白质的一般降解。从林伯氏白色念球菌(tritirachiumalbumlimber)中纯化得到。蛋白酶k,是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键。此酶经纯化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于蛋白酶k在尿素和SDS中稳定,还具有降解天然蛋白质的能力,因而它应用很广泛,包括制备脉冲电泳的染色体DNA,蛋白质印迹以及去除DNA和RNA制备中的核酸酶。蛋白酶k的一般工作浓度是50—100μg/ml。在较广的pH范围内(pH4-12.5)均有活性。值得注意的是,蛋白酶k在原位杂交技术中通常用于杂交前的处理,它具有消化包围靶DNA蛋白质的作用,以增加探针与靶核酸结合的机会,提高杂交信号.但蛋白酶k的浓度过高、消化时间过长或孵育温度过高时,都会对细胞的结构有一定的破坏,导致组织切片的脱落,细胞核的消失,从而影响杂交结果.EDTA缓冲液可以替代蛋白酶k的作用,解决上述出现的问题,并能达到理想的染色效果。
在生物相关的领域当中,经常需要对DNA进行提取分析,这样就可以快速有效地判断生物种类,还可以更深入地对基因组成进行研究,而这类研究当中非常关键的一步就是从细胞当中提取出DNA。要知道DNA处在细胞核当中,如果采取简单粗暴的手段来破坏细胞结构,也会同时破坏了更加脆弱的DNA结构,导致研究无法继续进行下去。而有了蛋白酶k的帮助,就能有效分解细胞当中的所有蛋白质,从而把细胞核里面的DNA释放出来,而且结构不会受影响。提取出来的DNA不但能够保持完整性,而且还保持了生命的活性,能够通过简单的方式进行增殖。
那么如何才能更好的保存蛋白酶k呢?
只要将蛋白酶k保存在-20℃冰箱里,避免反复冻融,就能有效保证12个月。而使用时也要注意,孵育温度为55至65℃,理想孵育温度为58℃,孵育时间为15分钟至48小时;理想孵育时间为2小时。
以上为大家介绍的就是蛋白酶k在DNA提取中的作用,有了这种技术,也就可以更方便更准确地进行生物基因领域的研究。目前这种技术也进入到了实际的生产当中,在遗传育种以及疾病治疗当中都发挥了重要的用途。