1、细胞传代

1）弃掉培养皿中的培养基，用1ml的PBS溶液洗涤两次。

2）用移液枪加入1ml胰酶，消化1min（37℃，5% CO2）。用手轻拍培养瓶壁，观察到细胞*从壁上脱落下来为止。

3）加入1ml的含血清培养基终止反应。

4）用移液枪多次吹吸，使细胞*分散开。

5）将培养液装入离心管中，1000rpm离心5min。

6）用培养液重悬细胞，细胞计数后选择0.8 x 106个细胞加入一个35mm培养皿。

7）将合适体积*培养液加入离心管中，混匀细胞后轻轻加入培养皿中，使其均匀分布。

8）将培养皿转入CO2培养箱中培养，第二天转染。

2、细胞转染

1）转染试剂的准备

A、将400ul去核酸酶水加入管中，震荡10s，溶解脂状物。

B、震荡后将试剂放在-20℃保存，使用前还需震荡。

2）选择合适的混合比例（1:1-1:2/脂质体体积ul：DNA质量ug）来转染细胞。在一个转染管中加入合适体积的无血清培养基。加入合适质量的MyoD或者EGFP的DNA，震荡后在加入合适体积的转染试剂，再次震荡。

3）将混合液在室温放置10-15min。

4）吸去培养板中的培养基，用PBS或者无血清培养基清洗一次。

5）加入混合液，将细胞放回培养箱中培养一个小时。

6）到时间后，根据细胞种类决定是否移除混合液，之后加入*培养继续培养24-48h。

3、第二次细胞传代

1）在转染后24h，观察实验结果并记录绿色荧光蛋白表达情况。

2）再次进行细胞传代，按照免疫染色合适的密度0.8 x 105个细胞/35mm培养皿将细胞重新分入培养皿中。

3）在正常条件下培养24h后，按照染色要求条件固定。