1.细胞吸除培育瓶内旧培育液。

2.参加无菌pbs洗液（5-8mL）悄悄润湿细胞，稀释多余的培育基，之后吸走洗液，动作要轻，不可吹打到细胞。

3.向瓶内参加含0.25%EDTA的胰蛋白酶混合液少许，以能覆满瓶底为限。 

4.置温箱中2~5分钟，一旦镜检发现细胞质回缩，细胞间隙增大后，细胞变圆，比较松动后，当即终止消化。
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5.参加该细胞对应的培育基6mL（T25培育瓶）或12mL（T75培育瓶）终止消化。

6.用吸管通过吸取的培育基悄悄反复吹打瓶壁细胞，使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。吹打时应尽量以少的次数将细胞从壁上吹下，不只要操控吹打的力度、次数，还要留意要将细胞尽可能吹成单个。这样既能削减死细胞，又能便于细胞再次均匀贴壁成长。

7.依据传代份额，将细胞悬液分瓶，再补充培育基后，静置于温箱培育，直止贴壁。

贴壁细胞在培育瓶长成致密单层后，持续成长的空间缺乏，培育基中的养分成份也耗费较多，同时代谢废物也有较多堆积，需要分瓶培育，对细胞进行传代扩增。关于贴壁不太紧的细胞如293，能够直接吹散后分瓶。而关于贴壁较紧的细胞如CHO，则需要以胰酶消化后再吹散分瓶。

关于悬浮细胞换液时只需要补液就行。

悬浮细胞的传代则不需要用胰酶消化，直接通过计数算好传代的份额，直接分瓶，补液。有些悬浮细胞趋于成团成长，此刻细胞成长状态杰出，当补液时，防止吹打。